【转帖】公子小丑鱼（Amphiprion ocellaris）胚胎发育的形态学...

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2 结果
2.1  不同盐度对公子小丑鱼幼鱼成活率的影响
    试验结果表明,在实验第42d，盐度为15和25组成活率为98.89±1.92%,盐度20、30、35组未出现死亡情况，成活率为100%。第70d，盐度15、25、35组成活率分别为97.78±1.92%、97.78±1.92%、97.78±3.85%,盐度20和30组成活率为98.89±1.92%。各盐度成活率均无显著差异。     
2.2 不同盐度对公子小丑鱼幼鱼生长及摄食的影响
   从表3-2和图3-2、3-3、3-4可以看出，公子小丑鱼分五个盐度养殖42d后的测量结果表明，公子小丑鱼的体重增重、相对体重增长率、饵料转换效率都在盐度为25、30时最高,盐度20时次之,盐度 35、15时较低。从表3-3和图3-2、3-3、3-4可以看出，养殖70d后的的体重增重、相对体重增长率、饵料转换效率结果也符合这一规律。从表3-2、3-3和图3-4可以看出，各盐度养殖70d后的饵料转换效率小于养殖42d后的饵料转换效率。
2.4  公子小丑鱼生长激素及其受体mRNA基因与β-actin mRNA基因的荧光定量PCR标准曲线
    将各基因所提取的质粒作为模板做10倍的梯度稀释, 共6个梯度, 每个梯度3个重复, 制作目的基因和内标基因的标准曲线（图3-12，3-13，3-14，3-15）。
    经过优化,实时荧光定量检测系统计算出公子小丑鱼生长激素及其受体基因与内标基因(β-actin)的标准曲线相关系数r均为0.99 以上,扩增效率为90%以上。几种基因的标准曲线斜率相差小于0.16,表明扩增效率非常接近。
2.5各盐度组垂体GHmRNA相对表达量
从实验结果看，盐度15组GH mRNA 表达水平最高，盐度25次之，而盐度35，30，20最低。
盐度对GHR1mRNA相对表达量影响明显具规律性，在低盐（15）或高盐（35）条件下，其表达量比盐度20-30条件下显著低( P<0.05)。
   与GHR1mRNA的变化规律相似，GHR2mRNA的相对表达量在盐度25时最高，盐度20、30次之，盐度35、15最低。

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3 讨论
3.1盐度变化对公子小丑鱼幼鱼存活与生长的影响
盐度是影响海水鱼类生长和成活率的一个重要的生态因子。鱼类对盐度变化的适应能力受体内渗透压的控制，在等渗环境中，鱼类不需要消耗太多的能量用于体内渗透压的调节，摄食能量可大部分用于生长和发育，此时鱼类摄食量最大、代谢率最低，生长和饵料利用效率也最大，而在非等渗环境（如低盐或高盐）中，鱼类需要消耗一定的能量来用于渗透压的调节，外界环境差异越大，消耗能量越多，具体表现为食欲下降，饵料利用效率和生长率降低,甚至出现负生长，直至死亡[43]。
本研究设置的五个盐度组都能满足公子小丑鱼存活的要求，幼鱼从盐度15到35，养殖42d和70d成活率没有显著性差异，都接近100%，所以在观赏鱼爱好者进行养殖时，如果不追求生长率，低盐度是一个不错的选择，这样可以节省大量的海盐成本。但对于观赏鱼繁殖场，需要迅速把幼鱼养殖到商品规格，则需要把盐度控制在25~30左右。
盐度的改变会影响到幼鱼原来正常的代谢, 如渗透压调节、内分泌等, 幼鱼需要耗费一部分能量来适应离子和渗透压调节的消耗, 在短时间内会难以适应盐度的变化[44]。尤其对于公子小丑鱼这样生活在盐度比较稳定的珊瑚礁区的鱼类，盐度的急剧变化会消耗额外的能量导致低盐度组和高盐度组的生长速度变慢。本实验仅持续70 d 时间, 对于长时间的高盐度或低盐度是否对生长或后期发育有影响, 尚需进一步深入研究。
与盐度为30的对照组相比，随着盐度的升高和降低，公子小丑鱼幼鱼的生长速率只在盐度为25时略有增加，随后都是呈下降的趋势。由此可以得出结论，本实验条件下90日龄的公子小丑鱼幼鱼适宜盐度范围为15~35, 最适盐度范围为25~30。
3.2 盐度变化对公子小丑鱼幼鱼生长激素及其受体mRNA水平的影响
本研究发现两种受体在盐度15~35的表达量随着盐度的升高呈现先增加后降低的趋势，与生长有相关性较强。马细兰对雄尼罗罗非鱼肝脏2 种生长激素受体基因表达结果表明，雄尼罗罗非鱼肝脏GHR1mRNA表达与其生长呈显著正相关[45]。其他一些学者的研究也证明了GHR1mRNA表达与生长呈正相关，与本研究结果相似。
GHR2是鱼类所特有的基因，目前只在黑鲷(Acahopagrus schlegelii)[46]、真鲷(Sparus aurata)[47]、南方鲇(Silurus meridionalis )[48]、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)[49]及尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)[50]、公子小丑鱼中克隆得到，本研究表明，两种受体在盐度15~35的表达量变化趋势与生长变化趋势相似，这与马细兰提出的雄尼罗罗非鱼GHR2的基因表达结果与其发育性变化和特定生长率无相关性不同[45]。GHR2是一种最近几年才发现鱼类基因，其对生长的影响暂不清楚，尚需要对其进行进一步的研究以了解其功能。
生长激素(GH)是调节动物生长、发育等代谢过程的一个重要内分泌因子，从五个盐度梯度看，GHmRNA表达水平无明显规律。在盐度15组GH mRNA 水平达到最大值，远远高于其他组，生长激素变化规律与生长及两种受体不同，推测可能是因为GH的另一个关键作用：参与鳃的渗透调节。其主要的生理机制是提高Na+-K+-ATP酶的活性和氯细胞的数目[51]，Mi在对红小丑的研究中发现，当把红小丑鱼从正常海水（35 psu）移入半咸水 (17.5 psu)中时，Na+-K+-ATP酶的活性和mRNA表达量均显著增加[52]。所以推测盐度为15时GH mRNA 表达水平突然增加与部分GH参加渗透压相关酶调控有关。其他学者的研究结果也显示,动物生长速度与GH水平并不完全平行[53,54], 但与肝脏GHR呈明显正相关[42]。

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小  结

在实验室水温26±1℃、盐度28±1的条件下，对公子小丑鱼胚胎发育可分为10个主要阶段：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、体节期、翻转期、血管形成期、器官形成期和孵化期。整个胚胎发育过程需200h左右。
在水温26±1℃的条件下,盐度为25、30时生长最快,盐度20时次之,盐度15、35时较慢;饵料转换效率也是在盐度25、30时最高,盐度20、35、15依次降低;相对体重增长率也与之相似。
第70d时取样进行分子生物学实验，结果表明，公子小丑鱼脑垂体GHmRNA水平在盐度15时最高，盐度25次之，盐度20、30、35时较低;肝脏GHR1mRNA水平在盐度20、25、30时最高，盐度35次之，盐度15时最低;肝脏GHR2mRNA水平在盐度25时最高，盐度20时次之，盐度30、35、15时较低。公子小丑鱼幼鱼GHR1和GHR2mRNA表达量与其生长呈正相关，而GHmRNA的表达量则与生长相关性不强。

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实际上还有很多图，可惜论坛限制，无法上传。

猫又

看贴不回帖 发表于 2016-11-14 14:08
实际上还有很多图，可惜论坛限制，无法上传。

明天再说吧。

娃哈哈

字数好多啊，辛苦了

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娃哈哈 发表于 2016-11-14 15:37
字数好多啊，辛苦了

的确，复制起来都很慢。

wai1444444

我的哥。。你这是要写小说吗

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wai1444444 发表于 2016-11-14 18:56
我的哥。。你这是要写小说吗

哥不是写小说的，哥写的是寂寞

想飞的鱼

小说作家